| 体外活性 | Collagenase Type III溶解于缓冲液(常用浓度为0.1%-1mg/mL),与组织样本在37°C孵育1-2小时后,通过离心洗涤获得细胞。该方法常用于从乳腺组织中制备原代细胞[1]。
实验步骤: 1.储存液配制
(1)准确称取100mg胶原酶,缓慢加入含有Ca²⁺、Mg²⁺的1mL Hank平衡盐溶液(HBSS)中,随后通过振荡促进其充分溶解,成功制备出浓度为100mg/mL(即100×)的储存液。
(2)使用0.22μm滤膜过滤除菌,立即使用或分装成小份量,在-20°C至-5°C的低温环境下避光冷冻保存,以确保溶液的质量和活性不受影响。
(3)需要根据特定的实验条件或参考文献资料确定所需浓度。用于组织和细胞分散的常用浓度为0.5-2.5mg/mL,用于软骨消化的常用浓度为1-2mg/mL。
2.实验方法
(1)将目标组织(如乳腺组织、结肠癌干细胞等)清洗干净,去除多余杂质。
(2)根据实验需求,将Collagenase Type III溶解于适当的缓冲液中,通常浓度为1-2mg/mL。
(3)将组织样本置于酶溶液中,通常在37°C下孵育1-2小时,具体时间根据组织类型和实验需求调整。
(4)加入适量的终止液(如含血清的培养基)以停止酶的活性。
(5)通过离心或过滤等方法分离出所需的细胞。 |